水霉菌的培养与治疗对比
基于水霉在分类地位上的分歧,本文将对比OIE中罗列的水霉相关疫病的生物学、鉴定、预防与治疗,以及传统水霉病和藻类的相关说法,以期为今后水霉的培养、鉴定以及预防工作打下基础。
以OIE对侵袭丝囊霉菌的描述为例,水霉具有无隔膜类真菌菌丝结构。水霉具有两种典型的游走孢子结构,初级游走孢子由孢子囊中的圆细胞组成,在孢子囊顶部释放并形成孢子群,然后迅速转化为肾型的次级游走孢子。次级游走孢子的横向双鞭毛结构,使其能在水中自由游动,它的活性时期取决于环境和宿主的状态。通常来说,游走孢子形成包囊、出芽并产生新的菌丝,但是游走孢子的第三代孢子可能会从包囊中释放(多游现象)。
水霉菌感染范围较为广泛,可感染鱼体皮肤使鳞片脱落,也可感染咽部、食道、肝脏、肾脏、脾脏等实质性器官。当鱼体表现出明显症状时,说明菌丝已侵入鱼体肌肉深处,并向外延伸长出大量菌丝。
在水产养殖中,被感染的鱼体在头部、皮肤及鳍表面可见灰白色菌丝。在严重感染情况下,50%皮肤表面被覆盖。当水霉菌侵入机体内并分泌蛋白质分解酶时,可促使鱼体出现焦躁不安症状并与固体物质不断摩擦,严重时鱼体衰弱,游动无力,食欲减退,最后衰弱而死。当鱼体体表受伤时,造成水霉的游走孢子黏附于伤口,吸取鱼体体内营养而迅速生长,被感染的鱼多数呈上蹿下跳不安状游动。
水霉(传统说法)
藻类
最适生长温度
13-25℃(游走孢子20℃;萌发25℃)
15-33℃
培养
保种介质:油菜籽、PDA、GPY、CMA、沙氏培养基(最适氮源:蛋白胨、硫酸铵、牛肉膏)
pH7-8
20mg/L (NH4)2SO4,2mg/L KH2PO4,0.2mg/L 柠檬酸铁(FeC6H5O7)
鉴定用基因片段
ITS1- ITS4:
TCCGTAGGTGAACCTGCGG,
TCCTCCGCTTATTGATATGC
(~750bp)
16S rRNA、ITS:
AGGTGAACCTGCGGAAGGATC,
CCTGCAGTCGACAKATGCTTAARTTCAGCRGG;
GTCGCACCTACCGATTGA,
CGGGTAGCCTTGCTTGAT
(1046bp);
TCCGTAGGTGAACCTGCGG,
TTGATATGCTTAAGTTCAGCG
18S rDNA:
CAAGTTTCTGCCCTATCAGCT,
GCTTTCGCAGTAGTTCGTCTT
(650bp);
ACCTGGTTGATCCTGCCAGT,
TCACCTACGGAAACCTTGT
(1680bp)
rbcL:
GATGCAAACTACACAATTAAAGATACTG,
ATTTTGTTCGTTTGTTAAATCCG
(1486bp)
人工感染
20℃,体表人工划伤1cm,浸泡攻毒;15±1℃,去除背鳍下方两侧鳞片,在肌肉处刮开2-5mm的伤口,并用纱布擦拭掉伤口表面的粘液,孢子浓度1×103
预防
消毒:盐度>2‰;聚维酮碘、抗生素、光合细菌、芽孢杆菌、壳聚糖、水霉灵、水霉净、菌毒消、美婷
中药:厚朴、苦参、五倍子、丁香、鱼藤粉、苦楝素、土槿皮、石榴皮和山苍子
消毒:生石灰、草木灰